Merci fir besicht Nature.com.D'Browser Versioun déi Dir benotzt huet limitéiert CSS Ënnerstëtzung.Fir déi bescht Erfahrung empfeelen mir Iech en aktualiséierte Browser ze benotzen (oder de Kompatibilitéitsmodus am Internet Explorer auszeschalten).An der Tëschenzäit, fir weider Ënnerstëtzung ze garantéieren, wäerte mir de Site ouni Stiler a JavaScript maachen.
Toxoplasma gondii ass en intrazelluläre protozoan Parasit deen d'Mikroëmfeld vum infizéierte Host moduléiert a bekannt ass mat der Heefegkeet vum Gehirtumorwachstum assoziéiert ze sinn.An dëser Etude hypothese mir datt exosomal miRNA-21 vun Toxoplasma Infektioun Gehirtumorwachstum fördert.Exosomen aus Toxoplasma-infizéiert BV2 Mikroglia goufen charakteriséiert an d'Internaliséierung vun U87 Gliomzellen gouf bestätegt.Exosomal microRNA Ausdrock Profiler goufen analyséiert mat Arrays vun microRNA an microRNA-21A-5p verbonne mat Toxoplasma gondii an entholl Zortéieren.Mir propagéieren och d'mRNA Niveau vun entholl-verbonne Genen an U87 glioma Zellen vun Mir-21 Niveauen an exosomes änneren an den Effet vun exosomes op mënschlech U87 glioma Zell Prolifératioun.An Exosomen vun U87 Glioma Zellen infizéiert mat Toxoplasma gondii, gëtt den Ausdrock vu MicroRNA-21 erhéicht an d'Aktivitéit vun Antitumor Genen (FoxO1, PTEN, an PDCD4) reduzéiert.BV2-ofgeleet Exosomen infizéiert mat Toxoplasma induzéieren Prolifératioun vun U87 Gliomzellen.Exosomen induzéieren Wuesstum vun U87 Zellen an engem Maustumormodell.Mir proposéieren datt erhéicht exosomal Mir-21 an Toxoplasma-infizéiert BV2 Mikroglia eng wichteg Roll als Zellwachstumspromoter an U87 Gliomzellen spille kann andeems Antitumor Genen downreguléieren.
Et gëtt geschat datt méi wéi 18.1 Millioune Fäll vu fortgeschrattene Kriibs weltwäit am Joer 2018 diagnostizéiert goufen, mat ongeféier 297.000 Zentralnervensystem Tumoren diagnostizéiert all Joer (1.6% vun all Tumoren)1.Virdrun Fuerschung huet gewisen datt Risikofaktoren fir mënschlech Gehirtumoren entwéckelen verschidde chemesch Produkter, Familljegeschicht, an ioniséierend Stralung vu Kapptherapeuteschen an diagnostesche Ausrüstung.Wéi och ëmmer, déi exakt Ursaach vun dëse Malignatiounen ass onbekannt.Ongeféier 20% vun alle Kriibs weltwäit ginn duerch infektiiv Agenten verursaacht, dorënner Viren, Bakterien a Parasiten3,4.Infektiiv Pathogenen stéieren d'genetesch Mechanismen vun der Hostzell, wéi DNA Reparatur an den Zellzyklus, a kënnen zu chronescher Entzündung a Schied un den Immunsystem féieren5.
Infektiiv Agenten, déi mam mënschleche Kriibs verbonne sinn, sinn déi heefegst virale Pathogenen, dorënner mënschlech Papillomaviren an Hepatitis B a C Viren.Parasiten kënnen och eng potenziell Roll bei der Entwécklung vu mënschleche Kriibs spillen.Verschidde Parasiten, nämlech Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis an Hymenolepis nana, goufen a verschiddenen Aarte vu mënschleche Kriibs 6,7,8 implizéiert.
Toxoplasma gondii ass en intrazelluläre Protozoan deen d'Mikroëmfeld vun infizéierten Hostzellen reguléiert.Dëse Parasit gëtt geschat fir ongeféier 30% vun der Weltbevëlkerung ze infizéieren, wat d'ganz Bevëlkerung a Gefor setzt9,10.Toxoplasma gondii kann vital Organer infizéieren, dorënner den Zentralnervensystem (ZNS), a verursaache schlëmm Krankheeten wéi fatale Meningitis an Ensephalitis, besonnesch bei immunkompromitterte Patienten9.Wéi och ëmmer, Toxoplasma gondii kann och d'Ëmfeld vum infizéierte Host änneren andeems d'Zellwachstum an d'Immunreaktiounen bei immunokompetenten Individuen moduléiert ginn, wat zu der Ënnerhalt vun enger asymptomatescher chronescher Infektioun9,11 féiert.Interessanterweis, no der Korrelatioun tëscht T. gondii Prävalenz a Gehirtumor Heefegkeet, e puer Berichter suggeréieren datt in vivo Host Ëmweltverännerungen wéinst chronescher T. gondii Infektioun d'Tumor-Mikro-Ëmfeld gleewen.
Exosomes sinn als interzellulär Kommunikator bekannt, déi biologesch Inhalter liwweren, dorënner Proteinen an Nukleinsäuren, aus Nopeschzellen16,17.Exosomes kënnen Tumor-verbonne biologesch Prozesser beaflossen wéi Anti-Apoptose, Angiogenese a Metastasen an der Tumormikro-Ëmfeld.Besonnesch, miRNAs (miRNAs), kleng Net-coding RNAs iwwer 22 Nukleotiden an Längt, si wichteg Post-transcriptional Gentherapie reegler datt méi wéi 30% vun mënschlech mRNA kontrolléieren duerch d'miRNA-entschlof silencing komplex (miRISC).Toxoplasma gondii kann biologesch Prozesser stéieren andeems d'MiRNA Ausdrock an infizéierte Hosten kontrolléiert.Host miRNAs enthalen wichteg Signaler fir Hostbiologesch Prozesser ze reguléieren fir d'Iwwerliewensstrategie vum Parasit z'erreechen.Also, studéiert Ännerungen am Host miRNA Profil op Infektioun mat T. gondii kann eis hëllefen d'Interaktioun tëscht dem Host an T. gondii méi kloer ze verstoen.Tatsächlech, Thirugnanam et al.15 virgeschloen datt T. gondii Gehirkarzinogenese fördert andeems säin Ausdrock op spezifesche Host miRNAs mat Tumorwachstum assoziéiert geännert gëtt a fonnt datt T. gondii Gliome bei experimentellen Déieren verursaache kann.
Dës Etude konzentréiert sech op d'Verännerung vum exosomale MiR-21 am Host Mikroglia infizéiert mat Toxoplasma BV2.Mir observéiert eng méiglech Roll vun verännert exosomal Mir-21 am Wuesstem vun U87 glioma Zellen wéinst der Retention am Kär vun FoxO1 /p27, déi d'Zil vun overexpressed Mir-21 ass.
Exosomen ofgeleet vu BV2 goufen mat Differential Zentrifugéierung kritt a mat verschiddene Methoden validéiert fir Kontaminatioun mat celluläre Komponenten oder aner Vesikel ze vermeiden.SDS-polyacrylamide gelies electrophoresis (SDS-PAGE) huet ënnerscheed Musteren tëscht Proteinen aus BV2 Zellen an exosomes extrahéiert (Dorënner 1A), a Echantillon sech fir d'Präsenz vun Alix bewäert, déi duerch Western blotting vun exosomal Protein Marker analyséiert gouf.Alix Etikettéierung gouf an exosome Proteinen fonnt awer net an BV2 Zell lysate Proteinen (Fig. 1B).Zousätzlech gouf gereinegt RNA aus Exosomen ofgeleet vu BV2 mat engem Bioanalyzer analyséiert.18S an 28S ribosomal subunits sech selten an der exosomal RNS Migratioun Muster observéiert, zouverlässeg Rengheet (Dorënner 1C) besot.Endlech, Transmissioun Elektronen microscopy gewisen, datt d'observéiert exosomes ongeféier 60-150 nm an Gréisst waren an hat eng Coupe-wëll Struktur typesch vun exosome morphology (Lalumi 1D).
Charakteriséierung vun Exosomen ofgeleet vu BV2 Zellen.(A) Sécherheetsdatenblatt Säit.Proteine ​​goufen aus BV2 Zellen oder Exosomen ofgeleet vu BV2 isoléiert.Proteinmuster ënnerscheede sech tëscht Zellen an Exosomen.(B) Western blot Analyse vun engem exosomal Marker (Alix).(C) Evaluatioun vu gereinegt RNA aus BV2 Zellen a BV2 ofgeleet Exosomen mat engem Bioanalyzer.Also, 18S an 28S ribosomal Ënnerunitéiten an BV2 Zellen goufen selten an exosomal RNA fonnt.(D) Transmissioun Elektronenmikroskopie huet gewisen datt Exosomen, déi aus BV2 Zellen isoléiert sinn, negativ mat 2% Uranylacetat gefierft goufen.Exosomen sinn ongeféier 60-150 nm an der Gréisst a Coupe-förmlech (Song a Jung, net publizéiert Donnéeën).
Zellular Internaliséierung vu BV2-ofgeleete Exosomen an U87 mënschlech Gliomzellen gouf mat konfokaler Mikroskopie observéiert.PKH26 markéiert Exosomen sinn am Zytoplasma vun U87 Zellen lokaliséiert.Käre sech mat DAPI Kierchefënster (Lalumi 2A), beweist, datt BV2-ofgeleet exosomes vun Provider Zellen internalized kann an d'Ëmwelt vun Destinataire Zellen Afloss.
Internaliséierung vu BV2-ofgeleet Exosomen an U87 Gliomzellen a BV2-ofgeleet Exosomen infizéiert mat Toxoplasma RH induzéiert Prolifératioun vun U87 Gliomzellen.(A) Exosomen, déi vun U87 Zellen verschlësselt sinn, gemooss duerch konfokaler Mikroskopie.U87 glioma Zellen sech mat exosomes markéiert mat PKH26 (rout) oder ouni Kontroll fir 24 Stonnen incubated.D'Käre goufen mat DAPI (blo) gefierft an duerno ënner engem konfokale Mikroskop (Skalabar: 10 μm, x 3000) observéiert.(B) U87 glioma Zell Prolifératioun war vun Zell Prolifératioun assay ermëttelt.U87 glioma Zellen sech mat exosomes fir déi uginn Zäit behandelt. *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P < 0,05 vum Student T-Test. *P < 0,05 通过学生t 检验获得. *P < 0,05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 kritt mam Student's t-Test.
Nodeem d'Internaliséierung vu BV2-ofgeleet Exosomen an U87 Gliomzellen bestätegt huet, hu mir Zellproliferatiounsassays gemaach fir d'Roll vun BV2-ofgeleeten Toxoplasma-ofgeleete Exosomen an der Entwécklung vu mënschleche Gliomzellen z'ënnersichen.D'Behandlung vun U87 Zellen mat exosomes aus T. gondii-infizéiert BV2 Zellen gewisen, datt T. gondii-infizéiert BV2-ofgeleet exosomes vill méi héich Prolifératioun vun U87 Zellen am Verglach zu Kontroll verursaacht (Lalumi 2B).
Zousätzlech huet de Wuesstum vun U118 Zellen déiselwecht Resultater wéi U87, well Toxoplasma stimuléiert Exosomen déi héchste Niveaue vun der Verbreedung verursaacht hunn (Donnéeën net gewisen).Baséierend op dësen Donnéeën kënne mir uginn datt BV2-ofgeleet Toxoplasma-infizéiert Exosomen eng wichteg Roll bei der Gliomzellproliferatioun spillen.
Fir den Effekt vun Toxoplasma-infizéierte BV2-ofgeleet Exosomen op Tumorentwécklung z'ënnersichen, hu mir U87 Gliomzellen an nackte Mais fir e xenograft Modell injizéiert an BV2-ofgeleet Exosomen oder RH-infizéiert BV2-ofgeleet Exosomen injizéiert.Nom Tumoren gouf no 1 Woch offensichtlech, gouf all experimentell Grupp vu 5 Mais no Tumorgréisst opgedeelt fir dee selwechte Startpunkt ze bestëmmen, an Tumorgréisst gouf fir 22 Deeg gemooss.
An Mais mat der U87 xenograft Modell, wesentlech méi grouss entholl Gréisst a Gewiicht goufen an der BV2-ofgeleet RH-infizéiert exosome Grupp um Dag 22 observéiert (Lalumi 3A, B).Op der anerer Säit, war et kee groussen Ënnerscheed zu entholl Gréisst tëscht der BV2-ofgeleet exosome Grupp an der Kontroll Grupp no ​​exosome Behandlung.Zousätzlech, Mais injizéiert mat glioma Zellen an exosomes visuell de gréisste entholl Volumen an der Grupp vun RH-infizéiert BV2-ofgeleet exosomes ugewisen (Figebam. 3C).Dës Resultater weisen datt BV2-ofgeleet Toxoplasma-infizéiert Exosomen de Gliomwachstum an engem Maustumormodell induzéieren.
Oncogenesis (AC) vu BV2-ofgeleet Exosomen an engem U87 xenograft Mausmodell.Tumorgréisst (A) a Gewiicht (B) goufe wesentlech erhéicht bei BALB /c nackte Mais behandelt mat RH-infizéierte Exosomen ofgeleet vu BV2.BALB /c nackte Mais (C) goufen subcutaneously mat 1 x 107 U87 Zellen injizéiert an Matrigel Mëschung suspendéiert.Sechs Deeg no der Injektioun goufen 100 μg vu BV2-ofgeleete Exosomen a Mais behandelt.Entholl Gréisst a Gewiicht goufen op der uginn Deeg an no Affer gemooss, respektiv. *P < 0,05. *P < 0,05. *R < 0,05. *P < 0,05. *P < 0,05. *P < 0,05. *R < 0,05. *P < 0,05.
D'Daten weisen datt 37 miRNAs (16 overexpressed an 21 downexpressed) mat Immunitéit oder Tumorentwécklung assoziéiert goufen an der Mikroglia no der Infektioun mam Toxoplasma RH Stamm (Lalumi 4A) wesentlech geännert.Relativ Ausdrock Niveau vum Mir-21 ënnert verännert miRNAs sech duerch real-Zäit RT-Hinnen alleguer an exosomes aus BV2 ofgeleet, exosomes mat BV2 an U87 Zellen behandelt bestätegt.Ausdrock vum Mir-21 zougedréckt eng bedeitend Erhéijung vun exosomes aus BV2 Zellen mat Toxoplasma gondii (RH Deformatioun) infizéiert (Lalumi 4B).Relativ Ausdrock Niveauen vum Mir-21 zu BV2 an U87 Zellen no Opnahmen vun verännert exosomes fräi (Lalumi 4B).Déi relativ Niveaue vum Mir-21 Ausdrock an de Gehirgewebe vun Tumorpatienten a Mais infizéiert mat Toxoplasma gondii (ME49 Stamm) waren méi héich wéi an de Kontrollen, respektiv (Figebam. 4C).Dës Resultater korreléieren mat Differenzen tëscht dem Ausdrockniveau vun virausgesot a bestätegt microRNAs kënschtlech an vivo.
Ännerungen am Ausdrock vun exosomal miP-21a-5p a Mikroglia infizéiert mat Toxoplasma gondii (RH).(A) Demonstréiert bedeitend Ännerungen am siRNA verbonne mat Immunitéit oder Tumorentwécklung no der T. gondii RH Infektioun.(B) Relativ Mir-21 Ausdrock Niveauen sech duerch real-Zäit RT-Hinnen alleguer zu BV2-ofgeleet exosomes, BV2-behandelt exosomes, an U87 Zellen fonnt.(C) Relativ miR-21 Ausdrock Niveauen goufen am Gehir Stoffer vun entholl Patienten fonnt (N = 3) a Mais infizéiert mat Toxoplasma gondii (ME49 Stamm) (N = 3). *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P < 0,05 Bäiträg mat der t-Kriterie Stéier. *P <0.05 gouf mam Student's t-Test kritt. *P < 0,05 通过学生t 检验获得. *P < 0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 kritt mam Student's t-Test.
Exosomen aus RH-infizéierte BV2 Zellen hunn zum Wuesstum vu Gliome in vivo an in vitro gefouert (Fig. 2, 3).Fir relevant mRNAs z'entdecken, iwwerpréift mir mRNA Niveauen vun antitumor Zil Genen, forkhead Box O1 (FoxO1), PTEN, a programméiert Zell Doud 4 (PDCD4) an U87 Zellen infizéiert mat exosomes ofgeleet aus BV2 oder RH BV2.Bioinformatik Analyse huet gewisen, datt verschidde entholl-verbonne Genen, dorënner de FoxO1, PTEN, an PDCD4 Genen, Mir-2121,22 bindend Siten hunn.mRNA Niveauen vun antitumor Zil Genen goufen an RH-infizéiert BV2-ofgeleet exosomes am Verglach zu BV2-ofgeleet exosomes reduzéiert (Lalumi 5A).FoxO1 huet reduzéiert Proteinniveauen an RH-infizéierte BV2-ofgeleet Exosomen am Verglach zu BV2-ofgeleete Exosomen (Dorënner 5B).Baséierend op dës Resultater, kënne mir bestätegen datt Exosomen ofgeleet vu RH-infizéierte BV2 anti-onkogene Genen downreguléieren, hir Roll am Tumorwachstum behalen.
Toxoplasma RH-infizéiert BV2-ofgeleet Exosomen induzéieren Ënnerdréckung vun Antitumor-Genen an U87 Gliomzellen duerch Toxoplasma RH-infizéiert BV2-ofgeleet Exosomen.(A) Echtzäit PCR vu FoxO1, PTEN a PDCD4 Ausdrock an Exosomen ofgeleet vum T. gondii RH-infizéierte BV2 am Verglach zu PBS Exosomen.β-actin mRNA war als Kontroll benotzt.(B) FoxO1 Ausdrock war vun Western blotting an densitometrie Daten sech statistesch mat der ImageJ Programm évaluéieren. *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P <0.05 gouf vum Student's t Test kritt. *P < 0,05 Bäiträg mat der t-Kriterie Stéier. *P <0.05 gouf mam Student's t-Test kritt. *P < 0,05 通过学生t 检验获得. *P < 0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 kritt mam Student's t-Test.
Fir den Effet vun miP-21 an exosomes op entholl-verbonne Gentherapie Regulatioun ze verstoen, goufen U87 Zellen mat engem inhibitor vun miP-21 benotzt Lipofectamine 2000 transfected an d'Zellen sech 24 Stonnen no transfection recoltéiert.FoxO1 an p27 Ausdrock Niveauen an Zellen transfected mam Mir-21 inhibitors sech zu Zellen mat BV2-ofgeleet exosomes mat qRT-Hinnen alleguer behandelt Verglach (Lalumi 6A, B).Transfection vum Mir-21 inhibitor an U87 Zellen bedeitend downregulated FoxO1 an p27 Ausdrock (Lalumi 6).
RH-infizéiert exosomal BV2-ofgeleet miP-21 verännert FoxO1 / p27 Ausdrock an U87 Gliomzellen.U87 Zellen sech mat miP-21 inhibitor benotzt Lipofectamine 2000 transfected an Zellen sech 24 Stonnen no transfection recoltéiert.FoxO1 an p27 Ausdrock Niveauen an Zellen transfected mat Mir-21 inhibitors sech mat Niveauen an Zellen mat BV2-ofgeleet exosomes behandelt mat qRT-Hinnen alleguer (A, B) Verglach.
Fir dem Host seng Immunantwort ze entkommen, transforméiert den Toxoplasma Parasit an eng Tissuezyst.Si parasitéieren verschidde Stoffer, dorënner d'Gehir, d'Häerz a Skelettmuskel, während der ganzer Liewensdauer vum Host a moduléieren d'Immunreaktioun vum Host.Zousätzlech kënne si den Zellzyklus an d'Apoptose vun de Hostzellen reguléieren, hir Verbreedung förderen14,24.Toxoplasma gondii infizéiert haaptsächlech Host dendritesch Zellen, Neutrophilen, a Monocyte / Makrophage Lineage, dorënner Gehir Mikroglia.Toxoplasma gondii induzéiert d’Differenzéierung vu Makrophagen vum M2 Phänotyp, beaflosst Woundheilung no Pathogeninfektioun, an ass och mat Hypervaskulariséierung a granulomatöser Fibrose assoziéiert.Dës Verhalenspathogenese vun der Toxoplasma Infektioun kann mat Marker verbonne sinn mat der Tumorentwécklung.Dat feindlecht Ëmfeld, dat vum Toxoplasma geregelt gëtt, kann dem entspriechende Precancer ausgesinn.Dofir kann et ugeholl ginn datt Toxoplasma Infektioun zu der Entwécklung vu Gehirtumoren bäidroe soll.Tatsächlech sinn héich Tariffer vun der Toxoplasma Infektioun am Serum vu Patienten mat verschiddene Gehirtumoren gemellt ginn.Zousätzlech kann Toxoplasma gondii en anere karzinogenen Effekter sinn a synergistesch handelen fir aner infektiiv Karzinogenen ze hëllefen Gehirtumoren z'entwéckelen.An dëser Hisiicht ass et ze bemierken datt P. falciparum an Epstein-Barr Virus synergistesch zu der Bildung vum Burkitt Lymphom bäidroen.
D'Roll vun Exosomen als Reguléierer am Beräich vun der Kriibsfuerschung gouf extensiv ënnersicht.Wéi och ëmmer, d'Roll vun Exosomen tëscht Parasiten an infizéierte Hosten bleift schlecht verstanen.Bis elo hu verschidde Reguléierer, dorënner sekretéiert Proteinen, d'biologesch Prozesser erkläert, duerch déi protozoan Parasiten géint den Hostattack widderstoen an d'Infektioun behalen.Viru kuerzem ass et e wuessend Konzept ginn datt protozoan-assoziéiert Mikrovesikelen an hir MikroRNAs mat Hostzellen interagéieren fir e favorabelt Ëmfeld fir hir Iwwerliewe ze kreéieren.Dofir, sinn weider Studien néideg der Relatioun tëscht verännert exosomal miRNAs an glioma Zell Prolifératioun ze entdecken.MicroRNA Ännerung (Cluster Genen miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 a miR-17-92) bindt un den STAT3 Promoteur an toxoplasma-infizéierte mënschleche Makrophagen, ass geregelt an induzéiert Anti -apoptosis als Äntwert op Toxoplasma gondii Infektioun 29.Toxoplasma Infektioun erhéicht den Ausdrock vu Mir-17-5p a Mir-106b-5p, déi mat verschiddene hyperproliferative Krankheeten 30 verbonne sinn.Dës Donnéeë suggeréieren datt Host miRNAs geregelt vun Toxoplasma Infektioun wichteg Molekülle fir Parasit Iwwerliewe a Pathogenese am Host biologesche Verhalen sinn.
Verännert miRNAs kënnen verschidden Aarte vu Verhalen beaflossen während der Initiatioun an dem Fortschrëtt vu bösartigen Zellen, dorënner Gliome: Selbststännegkeet vu Wuesstumssignaler, Onsensibilitéit fir Wuesstumsinhibitiounssignaler, Apoptose-Evasioun, onlimitéiert Replikatiounspotenzial, Angiogenese, Invasioun a Metastasen, an Entzündung.An glioma, geännert miRNAs goufen an e puer Ausdrock profiling Studien identifizéiert.
An der heiteger Etude bestätegt mir héich Niveaue vun miRNA-21 Ausdrock an toxoplasma-infizéiert Provider Zellen.Mir-21 gouf als ee vun de stäerkste oft overexpressed microRNAs zu staark erhéijen identifizéiert, dorënner gliomas, 33 a säin Ausdrock korreléiert mat der Schouljoer vun glioma.Akkumuléiert Beweiser hindeit datt Mir-21 e Roman Onkogen ass, deen als anti-apoptotesch Faktor am Gliomwachstum wierkt an héich an Stoffer a Plasma vu mënschleche Gehirmalignatiounen iwwerausdréckt ass.Interessanterweis dréit d'MiR-21 Inaktivéierung an Gliomzellen a Stoffer d'Inhibitioun vun der Zellproliferatioun aus der Caspase-ofhängeger Apoptose aus.Bioinformatic Analyse vum Mir-21 virausgesot Ziler réischt Multiple entholl suppressor Genen verbonne mat apoptosis Weeër, dorënner programmed Zell Doud 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, an forkhead Këscht O1 (FoxO1), mat der Mir-2121 bindend Site..22.38.
FoxO1, als ee vun den Transkriptiounsfaktoren (FoxO), ass an der Entwécklung vu verschiddenen Aarte vu mënschleche Kriibs involvéiert a kann den Ausdrock vun Tumorsuppressor Genen wéi p21, p27, Bim a FasL40 reguléieren.FoxO1 kann Zellzyklus-Inhibitoren wéi p27 binden an aktivéieren fir Zellwachstum z'ënnerdrécken.Ausserdeem ass FoxO1 e Schlësseleffektor vu PI3K / Akt Signaliséierung a reguléiert vill biologesch Prozesser wéi Zellzyklus Progressioun an Zelldifferenzéierung duerch Aktivatioun vun der p2742 Transkriptioun.
Als Conclusioun, gleewen mir datt exosomal Mir-21 ofgeleet aus Toxoplasma-infizéiert microglia eng wichteg Roll als Wuesstem regulator vun glioma Zellen spille kann (Lalumi 7).Wéi och ëmmer, weider Studien sinn néideg fir en direkten Link tëscht exosomal Mir-21, verännerter Toxoplasma Infektioun a Gliomwachstum ze fannen.Dës Resultater ginn erwaart e Startpunkt ze bidden fir d'Relatioun tëscht Toxoplasma Infektioun an der Heefegkeet vu Gliom ze studéieren.
E schematesch Diagramm vum Mechanismus vu Gliom (Gehir) Karzinogenese gëtt an dëser Etude proposéiert.Den Auteur zitt an PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
All experimentell Protokoller an dëser Etude, dorënner d'Benotzung vun Déieren, waren am Aklang mat der Seoul National University Animal Care and User Committee Standard Ethical Guidelines a goufe vum Institutional Review Board vun der Seoul National University School of Medicine (IRB Nummer SNU-) guttgeheescht. 150715).-2).All experimentell Prozedure goufen am Aklang mat ARRIVE Empfehlungen duerchgefouert.
BV2 Maus Mikroglia an U87 mënschlech Gliom Zellen goufen an Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) a Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) kultivéiert, respektiv, jidderee mat 10% Fetal Bovine Serum, 4 mM l- Glutamin, 0,2 mM Penicillin an 0,05 mM Streptomycin.Zellen goufen an engem Inkubator mat 5% CO2 bei 37 ° C kultivéiert.Eng aner Gliom Zelllinn, U118, gouf fir de Verglach mat U87 Zellen benotzt.
Fir exosomes aus T. gondii-infizéiert RH an ME49 Stämme ze isoléieren, T. gondii tachyzoites (RH Deformatioun) goufen aus der Bauchhëllef vun 6-Wochen-ale BALB /c Mais gesammelt 3-4 Deeg virdrun.Tachyzoite goufen dräimol mat PBS gewäsch a gereinegt duerch Zentrifugéierung an 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Fir Tachyzoite vum Stamm ME49 ze kréien, goufen BALB /c Mais intraperitoneal mat 20 Tissuezysten injizéiert an Tachyzoit Transformatioun an Zysten gouf gesammelt andeems de Bauchhöhle am 6-8ten Dag no der Infektioun (PI) wäschen.Mais infizéiert mat PBS.ME49 Tachyzoite goufen an Zellen ugebaut, ergänzt mat 100 μg /ml Penicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml Streptomycin (Gibco/BRL), a 5% Fetal Bovine Serum (Lonza, Walkersville, MD) .., USA) bei 37 °C a 5% Kuelendioxid.No der Kultivatioun an Vero Zellen goufen ME49 Tachyzoiten zweemol duerch eng 25 Jauge Nadel passéiert an dann duerch e 5 µm Filter fir Schutt an Zellen ze entfernen.No der Wäschung goufen d'Tachyzoiten am PBS44 resuspendéiert.Tissue Zysten vum Toxoplasma gondii Stamm ME49 goufen duerch intraperitoneal Injektioun vun Zysten erhale gelooss, isoléiert aus dem Gehir vun infizéierte C57BL /6 Mais (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).D'Gehirer vun ME49-infizéierte Mais goufen no 3 Méint PI gesammelt an ënner engem Mikroskop geschnidden fir Zysten ze isoléieren.Déi infizéiert Mais goufen ënner spezielle Pathogenfräie Bedéngungen (SPF) an der Seoul National University School of Medicine gehal.
Total RNS war aus BV2-ofgeleet exosomes ofgebaut, BV2 Zellen a Stoffer mat der miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Däitschland) no den Hiersteller d'Instruktioune, dorënner d'Inkubatiounszäit fir d'elution Schrëtt.D'RNA Konzentratioun gouf op engem NanoDrop 2000 Spektrofotometer bestëmmt.D'Qualitéit vun RNA microarrays war mat engem Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Holland) bewäert.
DMEM mat 10% exosome-aarm FBS gouf duerch Ultracentrifugatioun bei 100.000g fir 16 Stonnen bei 4 ° C virbereet an duerch en 0,22 µm Filter gefiltert (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 Zellen, 5 × 105, goufen an DMEM kultivéiert mat 10% exosome-entarmt FBS an 1% Antibiotike bei 37 ° C a 5% CO2.No 24 Stonnen vun incubation, tachyzoites vun Deformatioun RH oder ME49 (MOI = 10) goufen an d'Zellen dobäi an Net-invasiv Parasiten sech bannent enger Stonn geläscht a mat DMEM refilled.Exosomen aus BV2 Zellen goufen duerch modifizéiert Differential Zentrifugéierung isoléiert, déi meescht benotzt Method.Resuspendéiert den Exosompellet an 300 μl PBS fir RNA oder Proteinanalyse.D'Konzentratioun vun isoléierte Exosomen gouf mat engem BCA Protein Assay Kit (Pierce, Rockford, IL, USA) an engem NanoDrop 2000 Spektrofotometer bestëmmt.
Ausfäll aus BV2 Zellen oder Exosomen ofgeleet vu BV2 goufen an PRO-PREP ™ Protein Extraktioun Léisung (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) lyséiert a Proteine ​​goufen op Coomassie brillant blo gefierft 10% SDS Polyacrylamid Gelen gelueden.Zousätzlech goufen Proteinen fir 2 Stonnen op PVDF Membranen transferéiert.Western Blots goufen mat der Alix Antikörper (Zell Signaltechnologie, Beverly, MA, USA) als exosomal Marker validéiert.HRP-konjugéiert Geess Anti-Maus IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) an e LAS-1000 plus luminescent Bildanalysator (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) goufen als Secondaire Antikörper benotzt..Transmissioun Elektronenmikroskopie gouf gemaach fir d'Gréisst an d'Morphologie vun Exosomen ze studéieren.Exosomes isoléiert aus BV2 Zellen (6.40 µg / µl) goufen op Kuelestoff-beschichtete Mesh gemaach an negativ mat 2% Uranylacetat fir 1 min gefierft.Déi préparéiert Echantillon goufen bei enger Beschleunigungsspannung vun 80 kV observéiert mat engem JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) ausgestatt mat enger ES1000W Erlangshen CCD Kamera (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
BV2-ofgeleet exosomes sech mat der PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) fir 15 Minutten bei Raumtemperatur Kierchefënster.U87 Zellen, 2 × 105, mat PKH26-Label exosomes (rout) oder keng exosomes als negativ Kontroll, sech bei 37 ° C fir 24 Stonnen an engem 5% CO2 incubator incubated.U87 Zellkäre goufen mat DAPI (blo) gefierft, U87 Zellen goufen a 4% Paraformaldehyd fir 15 min bei 4 ° C fixéiert an dann an engem Leica TCS SP8 STED CW konfokale Mikroskopsystem (Leica Microsystems, Mannheim, Däitschland) analyséiert.beobachtbar.
cDNA gouf aus siRNA mat Mir-X siRNA éischt Strang Synthese an SYBR qRT-Hinnen alleguer Kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) synthetiséiert.Echtzäit quantitativ PCR gouf mat dem iQ5 Echtzäit PCR Detektiounssystem (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) mat Primer a Template gemëscht mat SYBR Premix gemaach.DNA war fir 40 Zykle vun denaturation amplified bei 95 ° C fir 15 s an annealing bei 60 ° C fir 60 s.D'Donnéeën vun all PCR Reaktioun goufen analyséiert mat der Datenanalysemodul vun der iQ ™ 5 optesch System Software (Bio-Rad).Relativ Ännerungen am Gentherapie Ausdrock tëscht ausgewielt Zil Genen an β-actin /siRNA (an U6) sech mat der Norm Kéier Method berechent.D'primer Sequenzen benotzt ginn an Table 1 gewisen.
3 x 104 U87 Glioma Zellen goufen an 96-Well Placke gesaat a gemëscht mat Toxoplasma-infizéierte Exosomen ofgeleet vu BV2 (50 μg / ml) oder nonpulse Exosomen ofgeleet vu BV2 (50 μg / ml) als Kontrollen op 12, 18 an 36 Stonnen. .D'Zell Prolifératioun Taux war mat der Zell zielen Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (Ergänzlech Zuelen S1-S3) 46 bestëmmt.
5-Wochen-al weiblech BALB /c nackte Mais goufen aus Orient Bio (Seongnam-si, Südkorea) kaaft an individuell an sterile Käfeg bei Raumtemperatur (22±2 °C) a Fiichtegkeet (45±15 °C) gehal.%) bei Raumtemperatur (22±2°C) a Fiichtegkeet (45±15%).En 12-Stonne Liichtzyklus an en 12-Stonnen donkel Zyklus goufen ënner SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center) gemaach.D'Mais goufen zoufälleg an dräi Gruppe vu 5 Mais opgedeelt an all Gruppe goufen subkutan mat 400 ml PBS injizéiert mat 1 x 107 U87 Gliomzellen a Wuesstumsfaktor reduzéiert BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA).Sechs Deeg no der Tumorinjektioun goufen 200 mg Exosomen aus BV2 Zellen (mat / ouni Toxoplasma Infektioun) an den Tumorplaz injizéiert.Zwanzeg-zwee Deeg no entholl Wonn, der entholl Gréisst vun Mais an all Grupp war mat engem caliper dräimol pro Woch gemooss, an der entholl Volumen war vun der Formel berechent: 0,5 × (Breet) × 2 × Längt.
MicroRNA Ausdrock Analyse benotzt miRCURY TM LNA miRNA Array, 7. Generatioun huet, mmu an rno Arrays (EXIQON, Vedbaek, Dänemark) deckt 1119 gutt-charakteriséiert Mais ënnert 3100 Mënsch, Maus a Rat miRNA erfaassen Sonden.Wärend dëser Prozedur gouf 250 bis 1000 ng vun der total RNS aus dem 5'-Phosphat duerch Behandlung mat Kallef intestinal alkalesche Phosphatase geläscht, gefollegt vun der Etikettéierung mat Hy3 grénge fluoreszenter Faarf.D'Label Echantillon goufen dann hybridized duerch Luede microarray Rutsch mat engem Hybridization Chamber Kit (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) an engem Hybridization Rutsch Kit (Agilent Technologies) benotzt.Hybridiséierung gouf fir 16 Stonnen bei 56 ° C duerchgefouert, duerno goufen d'Mikroarrays am Aklang mat den Empfehlungen vum Hiersteller gewäsch.Déi veraarbechte Microarray Rutschen goufen duerno mat engem Agilent G2565CA Microarray Scanner System (Agilent Technologies) gescannt.Scanned Biller goufen mat Agilent Feature Extraction Software Versioun 10.7.3.1 (Agilent Technologies) importéiert an d'Fluoreszenzintensitéit vun all Bild gouf mat der entspriechender GAL Datei vum modifizéierten Exiqon Protokoll quantifizéiert.Microarray Daten fir déi aktuell Etude ginn an der GEO Datebank ënner Bäitrëttsnummer GPL32397 deposéiert.
Ausdrock Profiler vun reife exosomal miRNAs an microglia vun RH oder ME49 Stämme infizéiert mat Toxoplasma sech mat verschiddenen Reseau Handwierksgeschir analyséiert.miRNAs mat entholl Entwécklung assoziéiert goufen benotzt miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) identifizéiert a gefiltert mat normaliséierter Signalintensitéit (log2) méi wéi 8,0.Ënner miRNAs, differentially ausgedréckt miRNAs goufen fonnt méi wéi 1,5-fantastesch verännert vun Filter Analyse vun miRNAs vun RH oder ME49 analyséieren verännert mat T. gondii infizéiert.
Zellen sech a sechs-gutt Placke (3 x 105 Zellen /gutt) an opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) benotzt Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) gesaat.Déi transfektéiert Zellen goufen 6 Stonnen kultivéiert an duerno gouf de Medium op frësch komplett Medium geännert.Zellen goufen 24 Stonnen no der Transfektioun gesammelt.
Statistesch Analyse gouf haaptsächlech mat Student d'T-Test mat Excel Software gesuergt (Microsoft, Washington, DC, USA).Fir experimentell Déier Analyse, war eng zwee-Manéier ANOVA mat Prism 3.0 Software gesuergt (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). P-Wäerter <0,05 goufen als statistesch bedeitend ugesinn. P-Wäerter <0,05 goufen als statistesch bedeitend ugesinn. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P Wäerter <0,05 goufen statistesch bedeitend ugesinn. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义. P 值< 0,05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P Wäerter <0,05 goufen statistesch bedeitend ugesinn.
All experimentell Protokoller, déi an dëser Etude benotzt goufen, goufen vum Institutional Review Board vun der Seoul National University School of Medicine (IRB Nummer SNU-150715-2) guttgeheescht.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Geschätzte global Kriibsheefegkeet a Mortalitéit am Joer 2018: GLOBOCAN Quellen a Methoden.Interpretatioun.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS En Abléck an d'Risikofaktoren vu Gehirtumoren an hir therapeutesch Interventiounen. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS En Abléck an d'Risikofaktoren vu Gehirtumoren an hir therapeutesch Interventiounen.Rashid, S., Rehman, K. an Akash, MS Eng Iwwerpréiwung vu Risikofaktoren fir Gehirtumoren a grouss therapeutesch Interventiounen. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Déift Verständnis vu Gehirtumor Risikofaktoren an therapeuteschen Interventiounen.Rashid, S., Rehman, K. an Akash, MS Eng Iwwerpréiwung vu Risikofaktoren fir Gehirtumoren a grouss therapeutesch Interventiounen.Biomedizinesch Wëssenschaft.Apdikter.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bakteriell-viral Interaktiounen am mënschlechen Orodigestive a weiblechen Genitaltrakt Cancers: E Resumé vun epidemiologeschen a Laborbeweiser. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bakteriell-viral Interaktiounen am mënschlechen Orodigestive a weiblechen Genitaltrakt Cancers: E Resumé vun epidemiologeschen a Laborbeweiser.Kato I., Zhang J. a Sun J. Bakteriell-viral Interaktiounen am Kriibs vum mënschleche Magen-Darmtrakt a weiblech Genitaltrakt: e Resumé vun epidemiologeschen a Labordaten. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Bakterio-viral Interaktioun am mënschleche mëndleche Kavitéit Verdauung a weibleche Fortpflanzungstrakt: Resumé vun der populärer Krankheetswëssenschaft a Laboratoire Beweiser.Kato I., Zhang J. a Sun J. Bakteriell-viral Interaktiounen am Mënsch gastrointestinal Kriibs a weiblech Genital Kriibs: e Resumé vun epidemiological an Labo Donnéeën.Kriibs 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Vun Infektioun zu Kriibs: Wéi DNA Tumorvirussen Hostzell zentrale Kuelestoff a Lipidmetabolismus änneren. Magon, KL & Parish, JL Vun Infektioun zu Kriibs: Wéi DNA Tumorvirussen Hostzell zentrale Kuelestoff a Lipidmetabolismus änneren.Mahon, KL a Parish, JL Feier Infektioun zu Kriibs: wéi DNA-baséiert Tumorvirussen Hostzellen zentrale Kuelestoff a Lipidmetabolismus änneren. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢 Magon, KL & Parish, JL Vun Infektioun zu Kriibs: Wéi DNA Tumorvirussen d'Hostzell zentrale Kuelestoff a Lipidmetabolismus änneren.Mahon, KL a Parish, JL Fires Infektioun zu Kriibs: Wéi DNA Tumorvirussen den zentrale Kuelestoff a Lipidmetabolismus an Hostzellen änneren.Open Biologie.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Catechol-Östrogen vu Schistosomen a Leberflukes an Helminth-assoziéiert Kriibs.virun.waarm bannen.5, 444 (2014).